根據(jù)凱氏定氮原理測定氮需要三個步驟,即消解、蒸餾、滴定。凱氏定氮亦可以完成自動蒸餾過程。當(dāng)被測定樣品消解后,上機完成下列化學(xué)反應(yīng):
蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解,分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)含量。
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4,濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反應(yīng)式為:
CuSO4 +2NH2—+H2S04+2H+=(NH4)2S04
2.在凱氏定氮器中與堿作用,通過蒸餾釋放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中
反應(yīng)式為:
?。∟H4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
3.用已知濃度的H2SO4(或HCI)標(biāo)準溶液滴定,根據(jù)HCI消耗的量計算出氮的含量,然后乘以相應(yīng)的換算因子,既得蛋白質(zhì)的含量
反應(yīng)式為:
?。∟H4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
?。∟H4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3